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二胡定音的准确与否同演奏效果有很大关系，二胡采用五度定音，一般用泛音进行调弦，“D、A定音”是二胡的标准定音。
二胡的音定得是否准确或高度是否适宜将直接关系着拉奏效果的顺利进行。所谓定音，就是利用琴轴装置把内外两根弦的音高分别固定下来。二胡一般都是采用五度定音。
很多乐器一般都采用泛音来调弦，二胡也不例外，利用泛音来校正二胡的五度定音，不但可保证五度定音的准确度，而且还能提高我们的辨音能力 。
根据二胡本身的性能特点来，为了能最大限度地求得二胡的共鸣，一般来说，内弦音高可把握在绝对音高“g—d‘”之间的任何一个高度上，外弦音高也就相应的定在“d‘一a’”之间。即内弦定为“g”，外弦也就定为“d‘”，内弦定为“A”，外弦也就定为“e’”等等。这个范围的定音高度，不失二胡那样浑厚圆润而又清澈明亮的发音特色 。
如果是伴奏歌唱，除了要考虑如何保持二胡的发音特色外，还要考虑适合发挥歌唱者的嗓音性能。例如给男低音伴奏，二胡的音高就应比男低音的嗓音高一个八度。对于歌曲中的“调号”（即“1—C”、“1。‘E”等）。我们仅把它作为定音的参考依据。每个歌唱者的嗓音情况都不一样，如果用二胡伴奏，考虑怎样定音，就要叫歌唱者先唱一唱，借此掌握住歌唱者声区音域。一般地说，利用歌唱者的最低音来作二胡的内弦定音，是最有利于歌唱者嗓音性能的充分发挥的 。
如果是登台作独奏、齐奏表演或参加乐队合奏，二胡的定音便要采用统一规定的“D、A定音”，人们常把“D、A定音”看作是二胡的标准定音 。
二胡一般采用泛音进行调弦，当然也可以利用其它乐器进行调弦，选用乐器调弦时要注意二胡本身的发音特点。
二胡一般采用泛音进行调弦，具体方法是：左手小指按住弦长（指千金与琴马之间的线段）的1/2处，运弓拉响外空弦音后，然后将小指轻浮，这时会得出一种纯净透明、类似竹笛声的外空弦高八度音，它与浑厚圆润的外空弦音形成一种强烈的色彩对比，当弓子在外弦上拉满一弓后，现在弓毛又转为擦内弦，这时小指离弦，用食指轻浮于全弦的1/3处，随着弓子的渐渐推进，此时会发出一种细腻清越，比内空弦高十三度的琴声，其音量略小于外弦1/2处的八度泛音。如果内外弦的五度音是调准了的，这两处的泛音音高应完全相等；如果它们之间的音高还存在着偏差，这说明五度音的准确度还不够。如果不求绝对音高，只要求相对音高的话，我们可以以任意一根弦的泛音音高为“参照音”，然后把另一根弦指定位置的泛音音高调到相等高度为止。
初次练习泛音，内弦1/3处泛音效果很可能不如外弦1/2处理想，这也许是内弦推弓的力度不如拉弓容易控制，可改变方式试试。初次练泛音，会发出烦燥刺耳的“杀鸡杀鸭”声，这可能是三方面原因造成的：一是弓毛擦弦用力不匀，二是触弦位置（即泛音点）不对，三是指头触弦是采用的实按。努力从这三个方面去改进，就有可能发出透明清越的泛音来。
除了用泛音来校对二胡的定音外，也可用其它固定音高乐器来帮助二胡定音。像钢琴、口琴、笛子及音笛、音叉等都可以用来定音，但选用这些乐器来定音一定要从二胡这件乐器的发音性能来考虑，过高过低都会影响演奏效果。过高则由于琴弦的张力大，使琴皮承受的压强超过了规定限度，振动极不协调，就会导致发音干枯单调，还会大大缩短琴弦琴皮的使用寿命；定得过低由由于琴弦过于松弛，琴皮共振效果差，造成发音晦涩暗淡、同时因琴弦失去必要的张力，使指头触弦时缺乏相应的反作用力，音准也不易控制。
